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Water has been used:as a component of the reaction mixture for polymerase chain reaction (PCR)in the dilution of plasmids for real-time PCRas a component of 1X TE buffer and library elution buffer (LEB)

用于蛋白质变性以及作为不溶性或变性蛋白的温和增溶剂。可用于从已由 6M 盐酸胍变性的样品(如包涵体)复性蛋白质。可与盐酸胍和二硫苏糖醇 (DTT) 一起用于复性变性蛋白以恢复其天然或活性形式。

用于蛋白质变性以及作为不溶性或变性蛋白的温和增溶剂。可用于从已由 6M 盐酸胍变性的样品(如包涵体)复性蛋白质。可与盐酸胍和二硫苏糖醇 (DTT) 一起用于复性变性蛋白以恢复其天然或活性形式。

尿素溶液已被用作尿素缓冲液，用于重链和 β2m 包涵体制剂的变性。它还被用作 1x 洗涤缓冲液的成分，以纯化 HIS 标记的小眼相关转录因子（MITF）。

尿苷已被用于研究原生动物寄生虫的核苷水解酶和哺乳动物尿苷磷酸化酶在酿酒酵母的URH1（尿苷水解酶）上的功能互补。它已用于检查长期应用尿苷对小鼠肝脏代谢的影响。应用：尿苷是一种嘧啶核苷，对 RNA 和膜的合成至关重要。它通过形成嘧啶核苷酸-脂质缀合物来帮助正常细胞功能和生长。

尿酸已用于：制备尿酸钠（MSU）结晶，以研究其对核定位富含亮氨酸重复序列1（NLRP1）基因表达的影响 还原剂，以测试其对正铁肌红蛋白形成的保护能力制备MSU，以研究其作为Clec12a特异性配体的用途。应用：尿酸是人类嘌呤降解的最终产物。它是由黄嘌呤氧化酶对黄嘌呤的作用形成。尿酸水平升高在临床上表现为痛风。在除人类以外的物种中，尿酸可进一步代谢。在除灵长类动物以外的哺乳动物中，尿酸可转化为尿囊素。在硬骨鱼中，尿囊素可进一步转化为尿囊酸盐，然后水解成尿素和乙醛酸。尿酸还可用于嘌呤的生物合成。它已被研究用作过氧亚硝基等生物自由基的清除剂。已有相关文献发表了关于尿酸的高效液相色谱（HPLC）和气相色谱-质谱（GC-MS）法。尿酸可促进血管平滑肌细胞中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达。

中文名：TAPS英文名：TAPS纯度：BioReagent, ≥99.5%(T)货号：T755935存储温度：室温产品介绍：查看阿拉丁官网此产品相关对应页面：https://www.aladdin-e.com/zh_cn/T755935.html产品目录：生物试剂 > 分子生物学 >...

凝血酶被用于重组融合蛋白的位点特异性切割，这些重组融合蛋白具有可接近的凝血酶识别位点以除去亲和标签。凝血酶已用在一项评估法国冻干血浆的体外止血特性的研究中。应用：凝血酶是止血方面的最终凝血蛋白酶，促进促凝血和抗凝血作用。

三氯乙酸已用于：蛋白质沉淀用作提取溶液组分，以测定丙二醛和谷胱甘肽在[3H]-胸苷掺入测定实验中沉淀转染和处理的细胞传统上用于沉淀蛋白质。用于通过定量沉淀测定蛋白质浓度。用作脱钙剂和显微镜样品的固定剂。应用：三氯乙酸(TCA)是三氯乙烯(TCE)代谢的重要代谢产物。

三（2-羧乙基）磷 盐酸盐被用于：作为IRE1透析缓冲液、RNA裂解缓冲液的组分用于 体外 转录RNA的 体外 裂解试验 在还原巯基得到总硫醇部分还原蛋白质样品水溶性试剂，用于二硫化物的选择性还原。在质谱应用中比 DTT 更稳定。应用：三（2-羧乙基）磷 盐酸盐（TCEP）是一种强还原剂，可在水溶液中稳定。它很容易以高特异性的方式按化学计量还原二硫化物。TCEP在pH 1.5到pH 9.0时表现出还原性，并在pH 4时还原脱氧抗坏血酸（DHA）。

三氯乙酸(TCA)已用于:确定其在涵盖心脏规格（cardiac specification）的暴露窗口（exposure window）期间对禽类胚胎的影响作为细胞固定剂 终止O-乙酰丝氨酸（硫醇）裂解酶（OASTL）酶促测定用于沉淀酸性核糖体蛋白（RP）传统上用于沉淀蛋白质。用于通过定量沉淀测定蛋白质浓度。用作脱钙剂和显微镜样品的固定剂。应用：三氯乙酸(TCA)来源于三氯乙烯(TCE)代谢。它可用作酸脱钙剂。TCA可用作核染色和蛋白质沉淀的固定剂。

在杂交瘤形成应用中作为选择剂。

TCEP.HCL 已被用于体内和体外的多种生物偶联应用，用于标记蛋白质和活生物，在温和的生理环境下具有良好的有效性。 TCEP.HCL适用于各种生物和合成应用。在酸性pH下，TCEP.HCL 可用于在水中不可逆地将有机二硫化物转化为硫醇。水溶性试剂，用于二硫化物的选择性还原。在质谱应用中比 DTT 更稳定。应用：三（2-羧乙基）膦盐酸（TCEP.HCl）是一种可用于含硫和含氮化合物的有用还原剂。TCEP.HCL及其产生的氧化物是水溶性的。 TCEP.HCL 具有富含电子的磷和氧原子，可以多种金属结合，如铑、铱、帕。在室温下它可在二恶烷中与铑和铱快速络合。 它可以还原各种肽和蛋白质中的二硫键。

对于胰蛋白酶消化肽，胰蛋白酶:肽的使用比例约为1:100至1:20。本品的典型用途是使贴壁细胞从培养表面脱落。 使细胞解离所需的胰蛋白酶浓度主要取决于细胞类型和培养物代数。 Trypsins也被用于细胞培养过程中的细胞再悬浮，在蛋白质组学研究中用于蛋白质的消化，以及在各种凝胶消化中。 其他的应用包括通过基于膜的技术评估结晶，以及在一项研究中确定蛋白质折叠速率和产量可以被动力学陷阱的存在所限制。

牛磺胆酸是一种胆汁酸，可用于研究胆盐对肠道功能和菌群发育的生理影响。阴离子洗涤剂用于蛋白质溶解。

在一项研究中使用泰洛沙泊评估重组人胰岛素的肺部吸收增强。 也用于研究蛋氨酸和胆碱缺乏时促进肝内脂肪酸蓄积的代谢途径。应用：泰洛沙泊是一种生物相容性表面活性剂 它是烷基芳基聚醚醇类的非离子液体聚合物。 可用作表面活性剂。

它已被用于一项研究中，以评估大肠杆菌的巯基敏感基因和启动子。应用：1-硫代甘油刺激需氧生长的大肠杆菌合成卟啉。在体外 和原位 是甘油激酶活性的抑制剂。

来自大豆（大豆）的胰蛋白酶抑制剂可用于：作为测定点蜂缘蝽中肠裂解液（M1）中内源性胰蛋白酶抑制剂的含量的标准品作为比较纯化蛋白对胰蛋白酶抑制活性的标准品通过在 MonoS 阳离子交换色谱中分级分离来监测胰蛋白酶的抑制活性 作为胰蛋白酶抑制剂应用：来自大豆（大豆）的胰蛋白酶抑制剂（也称为 Kunitz 胰蛋白酶抑制剂）是一种具有单个胰蛋白酶结合反应位点的 21 kDa 蛋白。

Estimating the nonideality of eutectic systems containing thermally unstable substances.: The paper explores the use of Tetramethylammonium chloride in studying the non-ideal behavior of eutectic mixtures, contributing to better thermal management in material science and engineering (Minceva M et al., 2023). Natural deep eutectic solvents as thermostabilizer for Humicola insolens cutinase.: This study examines how Tetramethylammonium chloride-based eutectic solvents can stabilize enzymes, enhancing their practical applications in biotechnological processes (Sisti L et al., 2023).

阿拉丁生产的UltraBio?293转染试剂(UltraBio?293 Transfection Reagent)是一种非常经济和高效的主要用于贴壁生长的HEK293、HEK293T、HEK293A、293FT等293系列细胞的基于新型阳离子脂质体的转染试剂。UltraBio?293转染试剂对HEK293细胞系列的转染效率约70%以上，同时其具有细胞毒性低、重复性好、操作简单、转染后无需更换培养基以及成本低等突出优点。贴壁细胞转染试剂的比较和选择请参考：http://www.aladdin-e.com。UltraBio?293转染试剂也能用于其它贴壁细胞的转染，但转染效率远低于阿拉丁生产的UltraBio?6000转染试剂和UltraBio?8000转染试剂。因此不太推荐使用UltraBio?293转染试剂用于293系列之外的细胞转染，仅当用于荧光素酶报告基因等检测灵敏度特别高的实验，并且用于一些比较容易转染的细胞时，才可以考虑使用UltraBio?293转染试剂。UltraBio?293转染试剂转染时血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少避免很多阳离子脂质体因为需要在转染时去除血清而对细胞造成的损伤。UltraBio?293转染试剂转染质粒进入贴壁培养的HEK293等293系列细胞后，通常在24-48小时后达到比较理想的蛋白表达水平。UltraBio?293转染试剂的转染效率可以通过转染表达EGFP或其它荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。UltraBio?293转染试剂的转染效果请参考图1。 图1. UltraBio?293转染试剂转染的转染效果图。UltraBio?293转染试剂转染EGFP表达质粒至HEK293 (A, B)、HEK293T (C, D)和293FT (E, F)细胞的效果图。其中A、C、E为荧光照片；B、D、F为相应的明场照片。每毫升UltraBio?293转染试剂大约可以转染10厘米培养皿33个、6厘米培养皿100个、6孔板200个孔、12孔板500个孔、24孔板1000个孔、48孔板2000个孔、96孔板5000个孔。注意事项：使用高纯度的DNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒，可以使用阿拉丁生产的质粒大量抽提试剂盒进行抽提，以保证可以获得较高的转染效率。转染前细胞必须处于良好的生长状态。对于非293系列细胞，推荐使用阿拉丁生产的Lipo6000?转染试剂或Lipo8000?转染试剂。对于悬浮培养的293系列细胞，推荐使用阿拉丁生产的Lipo293F?转染试剂。需自备不含抗生素的无血清培养液或Opti-MEM? Medium。Lipo293?转染试剂不能vortex或离心，可以用移液器轻轻吹打混匀或缓慢摇动混匀。Lipo293?转染试剂使用后请立即盖好盖子，避免长时间暴露在空气中，影响转染效率。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明：1.细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿参考六孔板)：在转染前一天(18-24小时)把约20-60万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度而定)培养到六孔板内，使第二天细胞能达到约60-70%。2.在进行下述转染步骤前，把培养有细胞的六孔板每孔换成2ml新鲜培养液(含有血清，不含抗生素)。可以使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素的存在对于有些细胞容易导致转染后出现一定的细胞毒性。3.参考下表，对于待转染的六孔板中每一个孔的细胞，取两个洁净无菌离心管，分别加入125μl不含抗生素和血清的DMEM培养液(高糖DMEM或低糖DMEM均可)或Opti-MEM? Medium，然后于其中一管加入2.5μg质粒DNA，并用枪轻轻吹打混匀；另一管加入5μlLipo293?转染试剂，用枪轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。将含有DNA的培养液用枪轻轻加入含Lipo293?转染试剂的培养液中，轻轻颠倒离心管或者用枪轻轻吹打混匀，室温静置15分钟(室温存放6小时内稳定)。96-well48-well24-well12-well6-well 6cm dish10cm dishLipo293?转染试剂0.2μl0.5μl1μl2μl5μl 10μl30μl无血清培养液或Opti-MEM? Medium5μl12.5μl25μl50μl125μl 250μl750μlDNA100ng250ng500ng1μg2.5μg 5μg15μg无血清培养液或Opti-MEM? Medium5μl12.5μl25μl50μl125μl 250μl750μl单独稀释好的Lipo293?转染试剂和DNA，混匀并室温静止放置15分钟每孔加入的混合物的量10μl25μl50μl100μl250μl 500μl1500μl按照上述用量每孔均匀滴加Lipo293细胞转染试剂和DNA的混合物，继续培养48-72小时注1：对于六孔板中一个孔的细胞，Lipo293?转染试剂的用量可以在3-12.5μl内进行适当调节，DNA用量可以在1-4μg的范围内进行适当调节。质粒用量(μg)和Lipo293?(μl)的用量1:2比较常用。最佳的转染条件，因不同细胞类型和培养条件而定，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。注2：对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况，可以把每个孔所需的Lipo293?转染试剂和DNA混合物分别配制，然后一起混合在同一个离心管内，后续混匀并孵育20分钟后，可以按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。注3：对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养面积按比例进行换算。如果转染RNA或寡核苷酸等可以参考转染DNA的条件进行。4.按照六孔板每孔250μl Lipo293?转染试剂-DNA混合物的用量，均匀滴加到整个孔内，随后轻轻混匀。5.继续培养约24-48小时后，即可用适当方式检测转染效果，例如荧光检测、Western、ELISA、报告基因等，或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选。常见问题：1.转染效率低：a.优化质粒与Lipo293?转染试剂比例，适当加大质粒用量。b.应使用高纯度、无菌、无污染物的质粒进行转染，DNA纯度方面A260/A280比值要接近1.8，通常宜控制在1.8-1.9范围内，偏低则有可能有蛋白污染，偏高则有可能有RNA污染。可以使用阿拉丁生产的质粒大量抽提试剂盒进行抽提，以保证可以获得较高的转染效率。c.需用无抗生素和无血清培养液配制Lipo293?转染试剂和质粒的混合物。d.细胞转染时应状态良好，并且使用本产品时细胞密度达到60-70%时最适合进行转染，过稀或过密都可能影响转染效率，不同细胞的最佳转染密度需要自行摸索。e.转染后培养时间不足，而被误认为转染效率偏低。细胞转染后至显著表达所需培养时间通常为24-48小时。f.检查细胞是否支原体感染，支原体感染会影响细胞增殖，并很可能影响转染效率。g.如果没有检测到目的蛋白表达，应该仔细核对转染质粒的测序结果，确保测序结果和读码框完全正确。启动子、复制起始位点、质粒大小都会影响基因表达水平。2.出现一定的细胞毒性：a.转染前，细胞至少铺板18-24小时。 b.目的基因的表达蛋白有毒性。此时可以和空载质粒转染效果比较，以确定是否是目的基因蛋白表达对细胞产生毒性。如果确定有细胞毒性，可以考虑适当减少质粒用量，并按照比例减少Lipo293?转染试剂。c.检查是否转染时细胞密度太低。d.检查细胞是否有支原体等微生物污染。附录：常用多孔板和培养皿的尺寸、培养面积、细胞培养量和推荐的培养体积等相关数据表：Multiple Well Plates or DishesSingle Well Only for PlatesDiameter (Bottom, mm)*Growth Area(cm2)*Average Cell YieldTotal Well Volume (ml)WorkingVolume (ml)Recommended Volume (ml)6 well34.89.59.5 × 105 16.81.9-2.9212 well22.13.83.8 × 105 6.90.76-1.14124 well15.61.91.9 × 105 3.40.38-0.570.548 well11.00.959.5 × 104 1.60.19-0.2850.2596 well6.40.323.2 × 104 0.360.10-0.200.1384 well2.70.0565.6 × 103 0.1120.025-0.0500.0301536 well1.63 × 1.63**0.0252.5 × 103 0.01250.005-0.0100.0103.5 cm dish3499.0 × 105 NA1.8-2.726 cm dish52212.1 × 106 NA4.2-6.3510 cm dish8.4555.5 × 106 NA11-16.51215cm dish141521.5 × 107 NA30.4-45.63524.5cm dish22.4 × 22.4**5005.0 × 107 NA100-150120*Diameter and growth area may vary depending on the manufacturer, and the listed sizes are from Corning. **These wells or dishes are square.

UltraBio?6000转染试剂(UltraBio?6000 Transfection Reagent)是一种非常高效的新型转染试剂，达到了国际最主流转染试剂的转染效果。适用于把质粒、siRNA或其它形式的核酸包括DNA、RNA、寡核苷酸、以及核酸蛋白复合物或带负电荷的蛋白转染到真核细胞中，也可以用于活体动物的核酸转染以用于基因治疗。UltraBio?6000转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、无明显的细胞毒性，并且对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用。贴壁细胞转染试剂的比较和选择请参考：http://www.aladdin-e.com。UltraBio?6000转染试剂的使用方法和常用的UltraBio?2000Reagent基本一致。并且经过对HEK293T、Hela、NIH3T3、HEK293FT、CHO等细胞的测试，转染效率也和UltraBio?2000Reagent相当甚至略高。UltraBio?6000转染试剂不仅适用于质粒、siRNA等单一成分的细胞转染，也适合多个质粒或者质粒与siRNA等的组合转染。UltraBio?6000转染试剂转染过表达质粒后，通常24-48小时后达到较高的蛋白表达水平，并且很多情况下蛋白表达量在转染后48小时显著高于转染后24小时；转染siRNA通常3-5天后对于目的基因的下调水平会比较理想。UltraBio?6000转染试剂转染细胞时，基本不受细胞培养液中的血清和抗生素的影响，即可以在血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染。但为了取得最佳的转染效果，推荐转染时使用不含抗生素的含血清的细胞培养液。UltraBio?6000转染试剂的转染效果可以通过转染表达EGFP等荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。UltraBio?6000转染试剂与UltraBio?2000Reagent转染效果比较请参考图1-6。对于六孔板，一个包装的C0526-0.5ml、C0526-1.5ml和C0526-7.5ml转染试剂大约可以分别转染100个、300个和1500个孔；对于24孔板，一个包装的C0526-0.5ml、C0526-1.5ml和C0526-7.5ml转染试剂大约可以分别转染500个、1500个和7500个孔。注意事项：使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒，可以使用阿拉丁生产的质粒大量抽提试剂盒进行抽提，以保证可以获得较高的转染效率。转染前细胞必须处于良好的生长状态。需自备不含抗生素的无血清培养液或Opti-MEM?培养液或普通的DMEM培养液。Lipo6000?转染试剂不能vortex或离心，宜缓慢晃动混匀。Lipo6000?转染试剂使用后请立即盖好盖子，避免长时间暴露在空气中，影响转染效率。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。\t'],使用说明：1.DNA转染：a.细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿可参考六孔板)：在转染前一天(18-24小时)按照每孔约20-70万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度等而定)接种到六孔板内进行培养，使第二天细胞密度能达到约70-90%。b.在进行下述转染步骤前，把培养有细胞的六孔板每孔换成2ml新鲜培养液(含有血清，不含抗生素)。可以使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素的存在对于有些细胞容易导致转染后出现一定的细胞毒性。c.参考下表，对于待转染的六孔板中每一个孔的细胞，取两个洁净无菌离心管，分别加入125μl不含抗生素和血清的DMEM培养液(高糖DMEM或低糖DMEM均可)或Opti-MEM? Medium，然后于其中一管加入2.5μg质粒DNA，并用枪轻轻吹打混匀；另一管加入5μl Lipo6000?转染试剂，用枪轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。室温静置5分钟后(通常最长不宜超过25分钟)，将含有DNA的培养液用枪轻轻加入含Lipo6000?转染试剂的培养液中，轻轻颠倒离心管或者用枪轻轻吹打混匀，室温静置5分钟(室温存放6小时内稳定)。96-well48-well24-well12-well6-well 6cm dish10cm dishLipo6000?转染试剂0.2μl 0.5μl 1μl 2μl 5μl 10μl 30μl 无血清培养液或Opti-MEM? Medium5μl 12.5μl 25μl 50μl 125μl 250μl 750μl DNA100ng 250ng 500ng 1μg 2.5μg 5μg 15μg 无血清培养液或Opti-MEM? Medium5μl 12.5μl 25μl 50μl 125μl 250μl 750μl 稀释好的Lipo6000?转染试剂和DNA分别室温静止放置5分钟，随后两者混合并混匀再室温静止放置5分钟每孔加入的混合物的量10μl 25μl 50μl 100μl 250μl 500μl 1500μl 按照上述用量每孔均匀滴加Lipo6000?转染试剂和DNA的混合物，4-6小时后更换培养液或直接继续培养注1：对于六孔板中一个孔的细胞，Lipo6000?转染试剂的用量可以在3-12.5μl范围内进行适当调节，DNA用量建议固定在2.5μg，但也可以在1-4μg的范围内进行适当调节。通常质粒用量(μg)和Lipo6000?(μl)的用量比例为1:2或1:3比较常用，如有必要可以在1:0.5-1:5的范围内优化转染效果，上表推荐的比例为1:2，此时Lipo6000?的用量相对较少，既经济又高效。最佳的转染条件，因不同的细胞类型和培养条件而有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。注2：质粒的浓度宜控制在0.5-5μg/μl范围内。注3：对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况可以把每个孔所需的Lipo6000?转染试剂和DNA混合物分别配制，然后一起混合在同一个离心管内，后续混匀并孵育5分钟后，可以按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。注4：对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养器皿的培养面积按比例进行换算。如果转染寡核苷酸或RNA等可以参考转染DNA的条件进行。d.无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，按照六孔板每孔250μl Lipo6000?转染试剂-DNA混合物的用量，均匀滴加到整个孔内，随后轻轻混匀。e.为达到最高的转染效率，细胞在转染后培养4-6小时后宜更换为新鲜的完全培养液(对于Hela细胞，推荐在转染4小时后更换培养液，对于NIH3T3、CHO、HEK293T和HEK293FT细胞，推荐在转染6小时后更换培养液)。f.继续培养约24-48小时后，即可用适当方式检测转染效果，例如荧光检测、Western、ELISA、报告基因等，或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选。2.siRNA转染：a.细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿可参考六孔板)：在转染前一天(18-24小时)按照每孔约20-70万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度等而定)接种到六孔板内进行培养，使第二天细胞密度能达到约30-50%。b.在进行下述转染步骤前，把培养有细胞的六孔板每孔换成2ml新鲜培养液(含有血清，不含抗生素)。可以使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素的存在对于有些细胞容易导致转染后出现一定的细胞毒性。c.参考下表，对于待转染的六孔板中每一个孔的细胞，取两个洁净无菌离心管，分别加入125μl不含抗生素和血清的DMEM培养液(高糖DMEM或低糖DMEM均可)或Opti-MEM? Medium，然后于其中一管加入100pmol siRNA，并用枪轻轻吹打混匀；而另一管加入5μl Lipo6000?转染试剂，用枪轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。室温静置5分钟后(通常最长不宜超过25分钟)，将含有siRNA的培养液用枪轻轻加入含Lipo6000?转染试剂的培养液中，轻轻颠倒离心管或者用枪轻轻吹打混匀，室温静置5分钟(室温存放6小时内稳定)。96-well48-well24-well12-well6-well 6cm dish10cm dishLipo6000?转染试剂0.2μl 0.5μl 1μl 2μl 5μl 10μl 30μl 无血清培养液或Opti-MEM? Medium5μl 12.5μl 25μl 50μl 125μl 250μl 750μl siRNA4pmol10pmol20pmol40pmol100pmol 200pmol600pmol无血清培养液或Opti-MEM? Medium5μl 12.5μl 25μl 50μl 125μl 250μl 750μl 稀释好的Lipo6000?转染试剂和siRNA分别室温静止放置5分钟，随后两者混合并混匀再室温静止放置5分钟每孔加入的混合物的量10μl 25μl 50μl 100μl 250μl 500μl 1500μl 按照上述用量每孔均匀滴加Lipo6000?转染试剂和siRNA的混合物，4-6小时后更换培养液或直接继续培养注1：对于六孔板中一个孔的细胞，Lipo6000?转染试剂的用量可以在2.5-7.5μl范围内进行适当调节，siRNA用量可以在50-250pmol的范围内进行适当调节。通常siRNA用量(pmol)和Lipo6000?(μl)的用量比例为20:1，如有必要可以在10:1-40:1的范围内优化转染效果，上表推荐的比例为20:1，此时Lipo6000?的用量相对较少，既经济又高效。最佳的转染条件，因不同的细胞类型和培养条件而有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。注2：siRNA的推荐浓度为20μM，常用的浓度范围为10-50μM。注3：对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况可以把每个孔所需的Lipo6000?转染试剂和siRNA混合物分别配制，然后一起混合在同一个离心管内，后续混匀并孵育5分钟后，可以按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。注4：对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养器皿的培养面积按比例进行换算。如果转染寡核苷酸或RNA等可以参考转染DNA的条件进行。d.无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，按照六孔板每孔250μl Lipo6000?转染试剂-siRNA混合物的用量，均匀滴加到整个孔内，随后轻轻混匀。e.为达到最高的转染效率，细胞在转染后培养4-6小时后宜更换为新鲜的完全培养液(对于Hela细胞，推荐在转染4小时后更换培养液，对于NIH3T3、CHO、HEK293T和HEK293FT细胞，推荐在转染6小时后更换培养液)。f.继续培养3-5天后，即可用适当方式检测siRNA对于靶基因的下调效果，例如qPCR、Western、ELISA、报告基因等。常见问题：1.转染效率低：a.优化质粒与Lipo6000?转染试剂比例，对于难转染的细胞，可适当加大质粒用量。b.应用高纯度、无菌、无污染物的质粒进行转染，DNA纯度方面A260/A280比值要接近1.8，通常宜控制在1.8-1.9范围内，偏低则有可能有蛋白污染，偏高则有可能有RNA污染。可以使用阿拉丁生产的质粒大量抽提试剂盒 进行抽提，以保证可以获得较高的转染效率。c.贴壁细胞转染时状态良好，细胞密度达30-50%时才可进行转染，过稀可能影响转染效率，细胞密度达到50-90%时通常不会影响转染效率。不同细胞的最佳转染密度需要自行摸索。悬浮细胞 宜在对数生长期进行转染。d.需使用无抗生素和无血清培养液配制Lipo6000?转染试剂和质粒或siRNA等的混合物。e.转染后培养时间不足，而被误以为转染效率偏低。不同细胞转染后至显著表达所需要培养的时间通常为24-48小时。f.检查细胞是否有支原体感染，支原体感染会影响细胞增殖，并很可能影响转染效率。g.如果没有检测到目的蛋白表达，应该仔细核对转染质粒的测序结果，确保测序结果和读码框完全正确。h.如果靶基因的敲减(knockdown)效果欠佳，应该考虑尝试设计不同的siRNA。2.细胞毒性较大：a.缩短转染时间，在转染后较短时间内更换新鲜的细胞培养液。b.减少质粒用量，按照比例减少Lipo6000?转染试剂。c.检查是否转染时细胞密度太低。附录：常用多孔板和培养皿的尺寸、培养面积、细胞培养量和推荐的培养体积等相关数据表：Multiple Well Plates or DishesSingle Well Only for PlatesDiameter (Bottom, mm)*Growth Area(cm2)*Average Cell YieldTotal Well Volume (ml)WorkingVolume (ml)Recommended Volume (ml)6 well34.89.59.5 × 105 16.81.9-2.9212 well22.13.83.8 × 105 6.90.76-1.14124 well15.61.91.9 × 105 3.40.38-0.570.548 well11.00.959.5 × 104 1.60.19-0.2850.2596 well6.40.323.2 × 104 0.360.10-0.200.1384 well2.70.0565.6 × 103 0.1120.025-0.0500.0301536 well1.63 × 1.63**0.0252.5 × 103 0.01250.005-0.0100.0103.5 cm dish3499.0 × 105 NA1.8-2.726 cm dish52212.1 × 106 NA4.2-6.3510 cm dish8.4555.5 × 106 NA11-16.51215cm dish141521.5 × 107 NA30.4-45.63524.5cm dish22.4 × 22.4**5005.0 × 107 NA100-150120*Diameter and growth area may vary depending on the manufacturer, and the listed sizes are from Corning. **These wells or dishes are square.

UltraBio?8000转染试剂(UltraBio?8000 Transfection Reagent)是阿拉丁最新研发的一种以纳米材料为基础的最便捷的高效细胞转染试剂，达到甚至超过了国际主流转染试剂的转染效果，并且转染过程无须任何孵育时间，实现了细胞转染的至简操作。适用于把质粒、siRNA或其它形式的核酸包括DNA、RNA、寡核苷酸、以及核酸蛋白复合物或带负电荷的蛋白转染到真核细胞中，也可以用于活体动物的核酸转染以及用于基因治疗。UltraBio?8000转染试剂的纳米技术可保证其瞬时转染和稳定转染时的可靠性和稳定性。UltraBio?8000转染试剂使用特别便捷，无血清培养液和核酸及转染试剂可以直接混匀，质粒转染无需任何孵育时间，即可直接加入到细胞培养器皿内，实现了细胞转染的至简操作。UltraBio?8000转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、通常观察不到细胞毒性，对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用，特别适用于难转染的贴壁细胞。UltraBio?8000转染试剂由于几乎完全没有细胞毒性，从而在转染后无需进行细胞培养液的更换，在转染24-48小时后直接收集细胞进行蛋白表达鉴定即可。UltraBio?8000转染试剂经过对小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3、人胚胎肾细胞HEK293/HEK293T、宫颈癌细胞Hela、结肠癌细胞HCT116、肝细胞HepG2和肺癌细胞A549等多种细胞的测试，转染效率和Thermo公司的UltraBio?3000Transfection Reagent、Promega公司的ViaFect Transfection Reagent相当，在一些细胞中甚至比UltraBio? 3000和ViaFect的转染效率更高。贴壁细胞转染试剂的比较和选择请参考：http://www.aladdin-e.com。UltraBio?8000转染试剂不仅适用于质粒、siRNA等单一成分的细胞转染，也适合多个质粒或者质粒与siRNA等的组合转染。UltraBio?8000转染试剂转染过表达质粒后，通常24-48小时后达到较高的蛋白表达水平，并且很多情况下蛋白表达量在转染后48小时显著高于转染后24小时；转染siRNA通常3-5天后对于目的基因的下调水平会比较理想。UltraBio?8000转染试剂转染细胞时，不受培养液中的血清和抗生素的影响，即可以在血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染。UltraBio?8000转染试剂的转染效果可以通过转染表达EGFP等荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。UltraBio?8000转染试剂与UltraBio? 3000 Reagent转染效果比较请参考图1-8。每毫升本转染试剂大约可以转染10厘米培养皿40个、6厘米培养皿125个、6孔板250个孔、12孔板625个孔、24孔板1250个孔、48孔板2500个孔、96孔板6250个孔。注意事项：加大Lipo8000?转染试剂用量容易导致转染效率显著下降，请优先按照推荐的转染试剂用量进行转染。如有必要再调整用量。使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒，可以使用阿拉丁生产的质粒大量抽提试剂盒进行抽提，以保证可以获得较高的转染效率。转染前细胞必须处于良好的生长状态。经测试即使在使用本产品转染后4-6小时更换细胞培养液，也不会对转染效率产生显著影响。如有必要，完全可以在转染后4-6小时更换细胞培养液。需自备不含抗生素的无血清培养液、Opti-MEM?培养液或普通的DMEM培养液。Lipo8000?转染试剂不能vortex或离心，宜缓慢晃动混匀。Lipo8000?转染试剂使用后请立即盖好盖子，避免长时间暴露在空气中，影响转染效率。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明：1.DNA转染：a.细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿可参考六孔板)：在转染前一天(18-24小时)按照每孔约20-70万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度等而定)接种到六孔板内进行培养，使第二天细胞密度能达到约70-80%。b.在进行下述转染步骤前，把培养有细胞的六孔板每孔换成2ml新鲜培养液(含有血清和抗生素的完全培养液)。对于Lipo8000?转染试剂，抗生素的存在不会影响转染效率，也不会在细胞转染后导致细胞毒性。c.参考下表，取一个洁净无菌离心管，对于待转染的六孔板中每一个孔的细胞，加入125μl不含抗生素和血清的DMEM培养液(高糖DMEM或低糖DMEM均可)或Opti-MEM? Medium，加入2.5μg质粒DNA，并用枪轻轻吹打混匀；再加入4μl Lipo8000?转染试剂，用枪轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。配制完成后，室温存放6小时内稳定。96-well48-well24-well12-well6-well 6cm dish10cm dish无血清培养液或Opti-MEM? Medium5μl12.5μl25μl50μl125μl 250μl750μlDNA100ng250ng500ng1μg2.5μg 5μg15μgLipo8000?转染试剂0.16μl0.4μl0.8μl1.6μl4μl 8μl24μl加入DNA后轻轻混匀，加入Lipo8000?转染试剂后轻轻混匀，随后可以直接进入下一步，无须室温孵育。每孔加入的混合物的量5μl12.5μl25μl50μl125μl 250μl750μl按照上述用量每孔均匀滴加Lipo8000?转染试剂和DNA的混合物，直接继续培养，后续无需在数小时后更换培养液注1：对于六孔板中一个孔的细胞，Lipo8000?转染试剂的用量可以在2-6μl范围内进行适当调节，DNA用量建议固定在2.5μg，但也可以在1-4μg的范围内进行适当调节。通常质粒用量(μg)和Lipo8000?(μl)的用量比例为1:1.6或1:2.5比较常用，如有必要可以在1:0.5-1:5的范围内优化转染效果，上表推荐的比例为1:1.6，此时Lipo8000?的用量相对较少，既经济又高效。最佳的转染条件，因不同的细胞类型和培养条件而有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。注2：质粒的浓度宜控制在0.5-5μg/μl范围内。注3：对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况，可以把每个孔所需的Lipo8000?转染试剂和DNA按照相应倍数加大用量，然后一起混合在同一个离心管内，后续混匀后，可以按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。注4：对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养器皿的培养面积按比例进行换算。如果转染寡核苷酸或RNA等可以参考转染DNA的条件进行。d.无论贴壁细胞还是悬浮细胞，按照六孔板每孔125μl Lipo8000?转染试剂-DNA混合物的用量，均匀滴加到整个孔内，随后轻轻混匀。e.继续培养约24-48小时后，即可用适当方式检测转染效果，例如荧光检测、Western Blot、ELISA、报告基因等，或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选。2.siRNA转染：a.细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿可参考六孔板)：在转染前一天(18-24小时)按照每孔约20-70万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度等而定)接种到六孔板内进行培养，使第二天细胞密度能达到约70-80%。b.在进行下述转染步骤前，把培养有细胞的六孔板每孔换成2ml新鲜培养液(含有血清和抗生素的完全培养液)。对于Lipo8000?转染试剂，抗生素的存在不会影响转染效率，也不会在细胞转染后导致细胞毒性。c.参考下表，取一个洁净无菌离心管，对于待转染的六孔板中每一个孔的细胞，加入125μl不含抗生素和血清的DMEM培养液(高糖DMEM或低糖DMEM均可)或Opti-MEM? Medium，加入100pmol siRNA，并用枪轻轻吹打混匀；再加入4μl Lipo8000?转染试剂，用枪轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。配制完成后，室温存放6小时内稳定。96-well48-well24-well12-well6-well 6cm dish10cm dish无血清培养液或Opti-MEM? Medium5μl12.5μl25μl50μl125μl 250μl750μlsiRNA4pmol10pmol20pmol40pmol100pmol 200pmol600pmolLipo8000?转染试剂0.16μl0.4μl0.8μl1.6μl4μl 8μl24μl加入siRNA后轻轻混匀，加入Lipo8000?转染试剂后轻轻混匀，室温孵育20分钟。每孔加入的混合物的量5μl12.5μl25μl50μl125μl 250μl750μl按照上述用量每孔均匀滴加Lipo8000?转染试剂和siRNA的混合物，直接继续培养，后续无需在数小时后更换培养液注1：对于六孔板中一个孔的细胞，Lipo8000?转染试剂的用量可以在2-6μl范围内进行适当调节，siRNA用量可以在50-250pmol的范围内进行适当调节。通常siRNA用量(pmol)和Lipo8000?(μl)的用量比例为25:1，如有必要可以在10:1-40:1的范围内优化转染效果，上表推荐的比例为25:1，此时Lipo8000?的用量相对较少，既经济又高效。最佳的转染条件，因不同的细胞类型和培养条件而有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。注2：siRNA的推荐浓度为20μM，常用的浓度范围为10-50μM。注3：对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况可以把每个孔所需的Lipo8000?转染试剂和siRNA按照相应倍数加大用量，然后一起混合在同一个离心管内，后续混匀后，可以按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。注4：对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养器皿的培养面积按比例进行换算。如果转染寡核苷酸或RNA等可以参考转染DNA的条件进行。d.无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，按照六孔板每孔125μl Lipo8000?转染试剂-siRNA混合物的用量，均匀滴加到整个孔内，随后轻轻混匀。e.继续培养约2天左右后，即可用适当方式检测siRNA对于靶基因的下调效果，例如qPCR、Western、ELISA、报告基因等。对于有些半衰期比较长的目的基因需要在转染siRNA或miRNA后3-5天，才能检测到RNA或蛋白水平的显著下降。常见问题：1.转染效率低：a.优化质粒与Lipo8000?转染试剂比例，对于难转染的细胞，可适当增加Lipo8000?转染试剂的用量。b.应使用高纯度、无菌、无污染物的质粒进行转染，DNA纯度方面A260/A280比值要接近1.8，通常宜控制在1.8-1.9范围内，偏低则有可能有蛋白污染，偏高则有可能有RNA污染。可以使用阿拉丁生产的质粒大量抽提试剂盒进行抽提，以保证可以获得较高的转染效率。c.贴壁细胞转染时状态良好，细胞密度达70-80%时才可进行转染，过稀或过密都可能影响转染效率，不同细胞的最佳转染密度需要自行摸索。悬浮细胞宜在对数生长期进行转染。d.需使用无抗生素和无血清培养液配制Lipo8000?转染试剂和质粒或siRNA等的混合物。e.转染后培养时间不足，而被误以为转染效率偏低。不同细胞转染后至显著表达所需要培养的时间通常为24-48小时。f.检查细胞是否有支原体感染，支原体感染会影响细胞增殖，并很可能影响转染效率。g.使用传代次数相对较少的细胞，细胞传代次数太多，对转染效率会有一定的影响。h.如果没有检测到目的蛋白表达，应该仔细核对转染质粒的测序结果，确保测序结果和读码框完全正确。启动子、复制起始位点、质粒大小都会影响基因表达水平。i.如果靶基因的敲减(knockdown)效果欠佳，应该考虑尝试设计不同的siRNA。2.出现一定程度的细胞毒性：a.转染前，细胞至少铺板 18-24 小时。b.质粒用量不变，Lipo8000?转染试剂的用量减少 25%。例如通常六孔板每孔使用 2.5μg 质粒，4μl Lipo8000?，如果发现有细胞毒性，六孔板每孔可以尝试使用 2.5μg 质粒，3μl Lipo8000?，此时经测试对于转染效率没有很明显的影响。c.减少质粒用量，按照比例减少 Lipo8000?转染试剂；或在前者的基础上 Lipo8000?转染试剂用量再减少 25%。d.检查是否转染时细胞密度太低，Lipo8000?转染时细胞密度以 70-80%为佳。e.某些细胞对 Lipo8000?转染试剂比较敏感，可以在转染后 4-6 小时更换细胞培养液，转染效率无显著影响。f.检查细胞是否有支原体等微生物污染。附录：常用多孔板和培养皿的尺寸、培养面积、细胞培养量和推荐的培养体积等相关数据表：Multiple Well Plates or DishesSingle Well Only for PlatesDiameter (Bottom, mm)*Growth Area(cm2)*Average Cell YieldTotal Well Volume (ml)WorkingVolume (ml)Recommended Volume (ml)6 well34.89.59.5 × 105 16.81.9-2.9212 well22.13.83.8 × 105 6.90.76-1.14124 well15.61.91.9 × 105 3.40.38-0.570.548 well11.00.959.5 × 104 1.60.19-0.2850.2596 well6.40.323.2 × 104 0.360.10-0.200.1384 well2.70.0565.6 × 103 0.1120.025-0.0500.0301536 well1.63 × 1.63**0.0252.5 × 103 0.01250.005-0.0100.0103.5 cm dish3499.0 × 105 NA1.8-2.726 cm dish52212.1 × 106 NA4.2-6.3510 cm dish8.4555.5 × 106 NA11-16.51215cm dish141521.5 × 107 NA30.4-45.63524.5cm dish22.4 × 22.4**5005.0 × 107 NA100-150120*Diameter and growth area may vary depending on the manufacturer, and the listed sizes are from Corning. **These wells or dishes are square.

? UltraBio?293F?转染试剂是 阿拉丁专门正对 HEK293，HEK293T，HEK293FT 等细胞研发的高性能阳离子聚合物转染试剂。UltraBio?293F?转染试剂对 HEK293 系列细胞，可实现高效、高重复性的细胞转染。UltraBio?293F兼具优异的阳离子聚合物/DNA 复合物形成能力和转染到细胞内 DNA 的快速释放能力，保证了优异的转染性能和极低的细胞毒性。储存方式2-8?C 保存。使用说明操作前注意事项1. 质粒：建议选用无内毒素的高质量质粒。质粒中的内毒素会导致转染效率显著下降，推荐使用无内毒素质粒抽提试剂盒进行质粒提取，保证质粒 A260/A280 比值在 1.8-2.0 之间，浓度不低于 500 ng/μL。2. 细胞：建议在进行转染实验时，尽量使用传代次数较少的细胞。如果细胞是刚复苏的，最好先传两代，以确保细胞状态稳定。转染应在细胞传代后 12-24 小时内进行，此时细胞密度应在 70%-80%之间。避免细胞受到细菌、真菌或支原体等污染，因为细胞状态会直接影响转染效率。3. 由于血清会影响质粒转染试剂复合物的形成，转染时抗生素会影响细胞的状态，因此在准备转染复合物时需用无血清无抗生素培养基稀释 DNA 及转染试剂。4. 转染试剂与 DNA 核酸用量比例范围为：每 1 μg DNA 使用 1.5~4 μL 体积的UltraBio?293F转染试剂。5. 本产品仅用于科研，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。操作步骤转染操作（以 6 孔板和 293T 细胞为例为例）：1. 接种准备转染的细胞：1.1 转染前一天，将 293T 细胞接种至细胞培养皿中培养，转染时细胞密度在 70%~80%为宜。2. 细胞转染：2.1 质粒稀释：取 100 μL 无血清无抗生素的培养基（如 Opti-MEM 等）稀释 2 μg DNA，轻轻混匀;2.2 转染试剂稀释：取 100 μL 无血清培养基加入 6 μL 的 Cyto293? Transfection Reagent 转染试剂，轻轻混匀;2.3 DNA-转染试剂复合物：将转染试剂稀释液逐滴滴加到质粒 DNA 稀释液中，轻轻混匀，室温静置 10 min，形成 DNA-转染试剂复合物。2.4 在形成复合物的过程中，需要移除细胞生长培养基，并在每孔中加入 2 mL 新鲜预热的不含抗生素含有血清的培养基。将 DNA 转染试剂复合物缓缓滴加到 293T 细胞中，随后轻轻混匀，置于培养箱中培养。待合适时间点进行转染结果的检测。不同培养皿/瓶推荐试剂用量培养器皿表面积（cm2）?DNA 用量（μg）转染试剂用量（μL）稀释液体积（μL）培养基用量（mL）96 well0.30.10.1100.148 well0.70.20.3200.224 well1.90.51500.512 well3.8125016 well1024100225 cm2 Flask2148200475 cm2 Flask58102050010 试剂用量T751605-1ml：~1,000 次，1 μL/well，24 wells

产品内容ComponentT665894-2500UTaq Antibody (5 U/μl)5×100 μl产品简介Taq?Antibody是抗Taq酶鼠单克隆抗体，适用于Hot?Start?PCR。Taq?Antibody与Taq酶结合后能抑制DNA聚合酶活性，进而能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及 ?引物二聚体引起的非特异性扩增。Taq?Antibody在PCR反应最初的DNA变性步骤中变性， DNA聚合酶活性恢复，达到热启动效果。因此无需对Taq酶抗体进行特殊失活处理。产品特点1.?在37°C，可抑制>95%的聚合酶活性。2.?可提高PCR反应的特异性和灵敏性，包括复杂的人基因组DNA或cDNA模板，低拷贝的模板，多重PCR等。3.?PCR反应速度快于普通化学修饰的聚合酶。活性定义Taq?Antibody与Taq?DNA?Polymerase混合，25°C孵育15?min后，将在37°C，30?min条件下抑制97%以上的1 U的Taq DNA Polymerase活性的Taq Antibody量定义为1U。 使用方法将Taq DNA Polymerase和Taq Antibody等体积混合，20-25°C下放置15 min冰上待用。注意：通过实验，我们建议Taq Antibody和 Taq DNA Polymerase混合的分子数之比为13：1较为合适，实际操作中由于引物、目的产物或Taq DNA Polymerase不同，可以摸索一系列的比例以得到最合适的结果。以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增300 bp的片段的PCR反应体系和反应条件， 实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。1.?PCR反应体系试剂50 μl 反应体系10× PCR Buffer5 μldNTP Mix，10 μM each1 μlForward Primer，10 μM1 μlReverse Primer，10 μM1 μlTemplate DNA4 μlTaq酶和抗体的混合液0.36 μlddH?Oup to 50 μl2.?PCR反应条件，可以按照各种PCR用DNA?Polymerase的常规PCR反应条件进行PCR反应。